組織原位雜交(Tissue in situ hybridization),即原位雜交組織化學技術和原位雜交細胞化學技術
原位雜交技術的基本原理
利用核酸分子單鏈之間有互補的堿基順序,通過堿基對之間非共價鍵的形成,出現穩定的雙鏈區,形成雜交的雙鏈。
1.兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過氫鍵結合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子
2.應用帶有標記的(有性同位素,如3H、35S、32P,熒光素、生物素、等非性物質)DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA)片段進行雜交
3.用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位
用原位雜交術,可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。
此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。
怎樣保證原位雜交實驗操作時的溫度?
建議儀器操作,人工操作的話要注意:
(1)對熒光原位雜交操作過程中可能使用的一些儀器進行溫控檢查,不符合要求的進行更換。
(2)盡可能地保持環境溫度在20度以上。
(3)針對需要預熱以達到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計對其進行測溫。
(4)同時檢測的樣本不超過4塊,操作一定要迅速,實驗人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。
熒光原位雜交(FISH)技術具有以下優點:
可多重染色:利用不同的熒光染料標記不同的探針,可以實現多重熒光原位雜交,從而同時檢測多個序列,提高實驗效率了。
高度創新性和性:FISH技術不僅可以用于研究已知基因或序列的染色體定位,還可以用于未基因或遺傳標記及染色體畸變的研究,在基因定性、定量、整合、表達等方面的研究中頗具優勢。