原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
原位雜交技術還在以下生物領域有應用：
細胞化學和學：原位雜交技術可以用于研究細胞內特定化學物質的定位和分布，例如檢測細胞內酶、、神經遞質等物質的分布和定位。此外，還可以應用于學研究，例如檢測細胞、分子的分布和定位等。
神經科學：在神經科學領域，原位雜交技術常被用于研究神經元的生長、發育和連接等過程。例如，通過標記特定基因的探針，可以檢測神經元中特定基因的表達和定位，進而研究其在神經信號傳遞、神經環路形成等方面的作用。
植物原位雜交在遺傳育種方面的應用主要包括：
檢測物種或品種特異性：通過植物原位雜交技術可以檢測出不同物種或品種之間基因表達的差異，從而為物種或品種特異性研究提供依據。
遺傳育種：通過植物原位雜交技術可以檢測到不同品種之間基因表達的差異，從而為遺傳育種提供重要的參考信息。例如，通過將特定的外源基因導入到植物細胞中，然后利用原位雜交技術檢測該基因在植物細胞中的位置和表達情況，為遺傳育種提供重要的參考信息。
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