原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標(biāo)記的核酸分子為探針,在組織細(xì)胞原位檢測(cè)特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過(guò)標(biāo)記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè),從而在細(xì)胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測(cè)cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標(biāo)本,包括哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物、菌、植物標(biāo)本。也可以檢測(cè)組織芯片。
植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個(gè)方面:
1. 制備組織樣品:從植物中取出需要研究的組織樣品,如根、莖、葉等。
2. 固定組織樣品:將組織樣品固定在載玻片上,通常使用或乙醇等化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行固定。
3. 處理組織樣品:對(duì)固定的組織樣品進(jìn)行脫水、透明化、脫脂等處理,以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。
4. 制備DNA探針:根據(jù)需要研究的基因序列,設(shè)計(jì)并合成DNA探針。DNA探針可以標(biāo)記熒光染料或性同位素,以便于檢測(cè)。
5. 雜交DNA探針:將DNA探針與組織樣品進(jìn)行雜交,通常需要在高溫下進(jìn)行,以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。
6. 檢測(cè)雜交信號(hào):通過(guò)熒光顯微鏡或計(jì)數(shù)器等設(shè)備,檢測(cè)DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況,確定目標(biāo)基因的表達(dá)模式和位置。