基因法轉化洋蔥表皮細胞:
分別用70%乙醇和滅菌蒸餾水清洗金粉(直徑為1 μm),加入滅菌蒸餾水制成金粉懸浮液,取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋蔥表皮的玻璃皿中,邊振蕩邊加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP質粒,逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亞精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2,振蕩混勻。基因GDS-80轟擊時氦氣罐的氣壓為1 300 psi,取10 μL DNA 包裹好的微粒懸浮液加到基因中央,進行轟擊,之后放置25℃避光過夜培養,使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。
為什么要提供GFP空載的對照圖片?
(1)作為整個實驗過程中的操作參照,可排除因實驗操作而導致目的基因沒有熒光信號的影響。
(2)作為載體體系的參照,確認構建載體時所使用的載體是可正常表達熒光蛋白的。
拍攝時為什么有明場通道?
(1)顯示細胞狀態,有活力的細胞應該有正確且明顯的細胞形態,變形或破碎的細胞說明此時細胞不是適狀態或細胞已。
(2)顯示熒光確實是細胞內蛋白表達的,而不是細胞碎片及雜質產生的雜光。