為什么不先對(duì)一個(gè)基因做預(yù)測(cè),在預(yù)測(cè)的結(jié)果上直接做共定位?
不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站有不同的計(jì)算方法,同一個(gè)基因在不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站也可能得出不同的定位結(jié)果。另外所有的結(jié)果都應(yīng)是基于實(shí)驗(yàn)得到的,對(duì)于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推薦先做普通定位,根據(jù)普通定位的結(jié)果再?zèng)Q定做哪種細(xì)胞器的共定位。
為什么有的基因做原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化時(shí)熒光蛋白不亮?
不同物種的細(xì)胞可能對(duì)基因表達(dá)有影響,當(dāng)在一種材料的原生質(zhì)體中觀察不到熒光時(shí),可以考慮換一種受體材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生質(zhì)體中無(wú)法觀察到熒光,此時(shí)可以考慮注射葉片來(lái)觀察熒光。
拍攝時(shí)為什么有明場(chǎng)通道?
(1)顯示細(xì)胞狀態(tài),有活力的原生質(zhì)體細(xì)胞應(yīng)該是飽滿圓潤(rùn)的,變形或破碎的細(xì)胞說(shuō)明此時(shí)細(xì)胞不是適狀態(tài)或細(xì)胞已。
(2)顯示熒光確實(shí)是細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的,而不是細(xì)胞碎片及雜質(zhì)產(chǎn)生的雜光。
GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會(huì)發(fā)出綠色熒光,從而可以地定位蛋白質(zhì)的位置。綠色螢光蛋白(GFP)是一個(gè)由約238個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì),從藍(lán)光到紫外線都能使其激發(fā),發(fā)出綠色熒光。通過(guò)基因工程技術(shù),綠色螢光蛋白(GFP)基因能轉(zhuǎn)進(jìn)不同物種的基因組,在后代中持續(xù)表達(dá),并且能根據(jù)啟動(dòng)子特異性地表達(dá)。
使用GFP必須構(gòu)建融合蛋白載體,并在轉(zhuǎn)染之后有效表達(dá)。這樣,若在熒光顯微鏡下看到細(xì)胞內(nèi)某一部位存在GFP信號(hào),說(shuō)明和GFP融合的蛋白也存在于該部位,這樣就達(dá)到了確定某物質(zhì)亞細(xì)胞定位的目的。
亞細(xì)胞定位方法:深入探索細(xì)胞內(nèi)部的關(guān)鍵技術(shù)
在生命科學(xué)領(lǐng)域,亞細(xì)胞定位是一種關(guān)鍵技術(shù),用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)、基因和其他分子的位置和功能。通過(guò)確定這些成分在細(xì)胞內(nèi)的具體位置,科學(xué)家可以更好地理解它們的作用和相互關(guān)系。本文將介紹亞細(xì)胞定位的基本概念和方法。
亞細(xì)胞定位的意義
亞細(xì)胞定位是一種研究細(xì)胞內(nèi)分子和蛋白質(zhì)位置的技術(shù),對(duì)于理解細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能至關(guān)重要。通過(guò)這種技術(shù),科學(xué)家可以確定蛋白質(zhì)、基因和其他分子在細(xì)胞內(nèi)的具體位置,從而更好地理解它們的作用和相互關(guān)系。此外,亞細(xì)胞定位還可以幫助科學(xué)家發(fā)現(xiàn)新的靶點(diǎn),為研發(fā)提供重要的信息。