原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
植物原位雜交的應用包括：
研究基因表達：通過觀察熒光信號的位置和數量，可以確定目標基因在植物組織中的表達模式和位置。
染色體定位：將目標基因與染色體中的特定位置進行比較，可以確定目標基因在染色體中的位置和分布。
基因：通過原位雜交技術，可以確定目標基因的序列和位置，為基因提供重要的參考信息。
檢測物種或品種特異性：通過原位雜交技術可以檢測出不同物種或品種之間基因表達的差異，從而為物種或品種特異性研究提供依據。
遺傳育種：通過原位雜交技術可以檢測出不同品種之間基因表達的差異，從而為遺傳育種提供重要的參考信息。
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