怎樣保證原位雜交實(shí)驗(yàn)操作時(shí)的溫度?
建議儀器操作,人工操作的話要注意:
(1)對(duì)熒光原位雜交操作過(guò)程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控檢查,不符合要求的進(jìn)行更換。
(2)盡可能地保持環(huán)境溫度在20度以上。
(3)針對(duì)需要預(yù)熱以達(dá)到要求溫度的試劑,在使用前必須使用溫度計(jì)對(duì)其進(jìn)行測(cè)溫。
(4)同時(shí)檢測(cè)的樣本不超過(guò)4塊,操作一定要迅速,實(shí)驗(yàn)人員要注意一些小部件的溫度,尤其是在冬季。
原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動(dòng)。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時(shí)間為一小時(shí)。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過(guò)夜。
植物原位雜交在遺傳育種方面的應(yīng)用主要包括:
異源染色質(zhì)及多種染色體畸變檢測(cè):通過(guò)遠(yuǎn)緣雜交把有用遺傳物質(zhì)基因的異源染色質(zhì)漸滲到植物中。如帶有幾種抗病基因的黑麥1R染色體已被整合到許多高產(chǎn)的小麥品種中。原位雜交技術(shù)則是鑒定外源染色體(質(zhì))的有效手段。
基因組印記研究:基因組印記是指一個(gè)基因的兩條染色體上的DNA序列存在差異。通過(guò)植物原位雜交技術(shù),可以檢測(cè)到基因組印記的存在和分布,從而幫助確定基因組的進(jìn)化、遺傳和功能特征。