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原位雜交第三天
1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。
2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。
3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。
4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色
5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。
6）4C冰箱保存。
植物組織原位雜交的步驟包括以下幾個方面：
1. 制備組織樣品：從植物中取出需要研究的組織樣品，如根、莖、葉等。
2. 固定組織樣品：將組織樣品固定在載玻片上，通常使用或乙醇等化學物質(zhì)進行固定。
3. 處理組織樣品：對固定的組織樣品進行脫水、透明化、脫脂等處理，以便于DNA探針的穿透和結(jié)合。
4. 制備DNA探針：根據(jù)需要研究的基因序列，設(shè)計并合成DNA探針。DNA探針可以標記熒光染料或性同位素，以便于檢測。
5. 雜交DNA探針：將DNA探針與組織樣品進行雜交，通常需要在高溫下進行，以便于DNA探針與RNA或DNA結(jié)合。
6. 檢測雜交信號：通過熒光顯微鏡或計數(shù)器等設(shè)備，檢測DNA探針與RNA或DNA的結(jié)合情況，確定目標基因的表達模式和位置。
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