同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?
一般情況下,如果操作沒有得到理想的結果,是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針,還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本,處理方法略有不同。
原位雜交實操中哪些因素比較重要?
重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關系到原位雜交的穩定性。
原位雜交技術的實驗結果
原位雜交技術的實驗結果包括陽性信號和陰性信號的判斷標準。陽性信號是指探針與目標核酸序列特異性結合形成的雙鏈復合物,在顯色反應、熒光染色或性同位素標記下呈現出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標核酸序列結合,不呈現任何信號。實驗結果的分析需要結合探針的特異性和敏感性、組織或細胞的原始結構以及實驗條件等因素綜合進行。