原理簡介
GFP、RFP等熒光蛋白因其的熒光性質和靈敏性,常作為報告基因研究并分析基因產物在細胞中的定位和相互作用等。將目標蛋白與熒光蛋白的N端或者C端融合,通過瞬時轉化技術或穩定遺傳轉化技術,使得該融合蛋白在受體材料細胞內表達,目標蛋白會牽引熒光蛋白一起定位到目標細胞器,通過顯微鏡觀察熒光蛋白在細胞內顯示的位置,確定目標蛋白的位置,從而確定目標蛋白的亞細胞定位情況。
雙分子熒光互補技術是一種在生物學領域中廣泛應用的實驗技術。該技術利用熒光標記的兩個分子,通過熒光共振能量轉移(FRET)原理,檢測兩個分子之間的相互作用。下面將詳細介紹雙分子熒光互補技術的原理、實驗步驟、應用和發展趨勢。
雙分子熒光互補技術的原理
雙分子熒光互補技術是基于熒光共振能量轉移(FRET)原理的。當兩個熒光基團在一個緊密的空間內相互靠近時,一個熒光基團發射的熒光能量會被另一個基團吸收,導致第二個基團也發射熒光。這種熒光能量轉移現象稱為熒光共振能量轉移。通過檢測兩個熒光基團之間的能量轉移效率,可以推斷出兩個分子之間的距離和相互作用情況。