為什么不先對(duì)一個(gè)基因做預(yù)測(cè),在預(yù)測(cè)的結(jié)果上直接做共定位?
不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站有不同的計(jì)算方法,同一個(gè)基因在不同的預(yù)測(cè)網(wǎng)站也可能得出不同的定位結(jié)果。另外所有的結(jié)果都應(yīng)是基于實(shí)驗(yàn)得到的,對(duì)于不清楚可能定位在哪里的基因,一般推薦先做普通定位,根據(jù)普通定位的結(jié)果再?zèng)Q定做哪種細(xì)胞器的共定位。
為什么有的基因做原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化時(shí)熒光蛋白不亮?
不同物種的細(xì)胞可能對(duì)基因表達(dá)有影響,當(dāng)在一種材料的原生質(zhì)體中觀察不到熒光時(shí),可以考慮換一種受體材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生質(zhì)體中無(wú)法觀察到熒光,此時(shí)可以考慮注射葉片來(lái)觀察熒光。
拍攝時(shí)為什么有明場(chǎng)通道?
(1)顯示細(xì)胞狀態(tài),有活力的原生質(zhì)體細(xì)胞應(yīng)該是飽滿(mǎn)圓潤(rùn)的,變形或破碎的細(xì)胞說(shuō)明此時(shí)細(xì)胞不是適狀態(tài)或細(xì)胞已。
(2)顯示熒光確實(shí)是細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)的,而不是細(xì)胞碎片及雜質(zhì)產(chǎn)生的雜光。
1. 葉綠體
葉綠體是植物細(xì)胞中重要的細(xì)胞器之一,它們負(fù)責(zé)進(jìn)行光合作用,將光能轉(zhuǎn)化為化學(xué)能。為了定位葉綠體,我們可以使用一種名為熒光素的化合物來(lái)標(biāo)記它們。熒光素可以被葉綠體中的葉綠素吸收,從而發(fā)出綠色熒光。在洋蔥細(xì)胞中,葉綠體通常位于細(xì)胞的邊緣或周?chē)?
2. 線粒體
線粒體是細(xì)胞中的另一個(gè)重要細(xì)胞器,它們負(fù)責(zé)產(chǎn)生細(xì)胞所需的能量。為了定位線粒體,我們可以使用一種名為MitoTracker的化合物來(lái)標(biāo)記它們。MitoTracker可以穿過(guò)細(xì)胞膜并進(jìn)入線粒體,從而發(fā)出紅色熒光。在洋蔥細(xì)胞中,線粒體通常位于細(xì)胞的中央或周?chē)?
亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)分離定位法
通過(guò)離心等技術(shù)分離各亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),然后從分離物種進(jìn)一步提取蛋白質(zhì),對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分析或檢測(cè),從而獲得目標(biāo)蛋白的定位。本方法適合研究某蛋白質(zhì)組級(jí)別的細(xì)胞器定位,通常與雙向凝膠電泳分離和質(zhì)譜技術(shù)相結(jié)合。
生物信息學(xué)預(yù)測(cè)
通過(guò)生物信息學(xué)手段,借助一些在線工具對(duì)蛋白的亞細(xì)胞定位信息進(jìn)行預(yù)測(cè),這種方法可以在短時(shí)間獲得大量蛋白的預(yù)測(cè)信息,不僅輔助于實(shí)驗(yàn),還能省時(shí)省力節(jié)約成本。