核酸原位雜交可根據其檢測物而分為細胞內原位雜交和組織切片內原位雜交;根據其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經過組織細胞的固定,預雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
原位雜交技術的定義和基本原理原位雜交技術是一種基于核酸分子雜交原理,將標記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結合,從而在細胞水平上檢測目標核酸序列分布的技術。原位雜交技術的基本原理是利用DNA或RNA的互補性,通過加熱或化學反應使探針與組織或細胞中的目標核酸序列形成雙鏈復合物,進而實現目標核酸序列的定位。
熒光原位雜交(FISH)技術具有以下優點:
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號的檢測比性信號的檢測更靈敏,可以檢測出低拷貝數的DNA序列,甚至可以檢測單個基因序列。
快速簡便:FISH技術操作簡便,雜交過程可以在數小時或數天內完成,而且不需要過于復雜的設備,便于在實驗室開展。