把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號(hào)面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個(gè)不對(duì)稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對(duì)應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時(shí)。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號(hào)的位置,同時(shí)在不對(duì)稱分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記??蓮牡灼先∠峦该骷垼ㄟ^對(duì)比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來鑒定陽性菌落。
原位雜交雜交液
(一)雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。
(三)賈酰胺可使雜交溫度降低,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。
(四)硫酸葡聚糖能與水結(jié)合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達(dá)到提高雜交率的目的。
原位雜交技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域
原位雜交技術(shù)在醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)和工業(yè)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。在醫(yī)學(xué)方面,原位雜交技術(shù)可用于檢測(cè)癌細(xì)胞、病毒和細(xì)菌等致病微生物,幫助醫(yī)生制定的診斷和方案。在農(nóng)業(yè)方面,原位雜交技術(shù)可用于基因定位、品種鑒定和遺傳育種等領(lǐng)域,提高農(nóng)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。在工業(yè)方面,原位雜交技術(shù)可用于檢測(cè)基因工程產(chǎn)品中的外源DNA,保證產(chǎn)品的安全性和穩(wěn)定性。