原位雜交技術(shù)(in situhybridization)是以標記的核酸分子為探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分子的技術(shù)。使含有特異序列、經(jīng)過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發(fā)生雜交,再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA??梢愿鞣N種屬的標本,包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標本。也可以檢測組織芯片。
在原位雜交過程中,需要使用標記的核酸探針,通常是在性核素或非性物質(zhì)中標記的。這些探針可以通過不同的方式制備,例如從已知序列的DNA或RNA制備,或者通過使用生物信息學方法設(shè)計和合成新的探針。
在進行原位雜交時,細胞或組織需要固定在適當?shù)闹С治锷希巛d玻片。然后,探針與細胞或組織中的DNA或RNA進行雜交,通常是在加熱條件下進行的。接下來,通過洗滌和顯影步驟去除未結(jié)合的探針和信號增強劑,后用顯微鏡觀察雜交信號的位置。