把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個不對稱的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽性雜交信號的位置,同時在不對稱分布點的位置上作出標(biāo)記。可從底片上取下透明紙,通過對比紙上的點與瓊脂上的點來鑒定陽性菌落。
預(yù)雜交
1)每個管中置換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘,避免振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預(yù)雜交4小時以上。
雜交
1)吸去預(yù)雜交的HYB+,加上100ul已加入探針的HYB+溶液(探針濃度約為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴過夜。
注:雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,探針結(jié)合越好,溫度越高,背景越小。
原位雜交技術(shù)在許多領(lǐng)域都有應(yīng)用,以下是其中幾個具體應(yīng)用:
細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué):在細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)常被用于研究基因的表達(dá)和定位。例如,通過標(biāo)記特定基因的探針,可以在細(xì)胞或組織中檢測特定基因序列的存在和分布,進(jìn)而了解基因在細(xì)胞分化、發(fā)育和功能中的作用。
基因組學(xué)和遺傳學(xué)研究:原位雜交技術(shù)也可用于基因組學(xué)和遺傳學(xué)研究。例如,通過標(biāo)記多個基因探針,可以檢測基因組中的多個基因序列,從而進(jìn)行基因定位、基因表達(dá)譜分析、基因突變檢測等研究。
病毒學(xué)和病原微生物研究:在病毒學(xué)和病原微生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)常被用于檢測和定位病毒、細(xì)菌等病原微生物。例如,通過標(biāo)記特異性或核酸探針,可以檢測組織中病原微生物的存在、情況以及分布特征,從而為疾病的預(yù)防、診斷和提供依據(jù)。
總之,原位雜交技術(shù)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、基因組學(xué)、遺傳學(xué)、病毒學(xué)和病原微生物學(xué)等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用價值,為人類認(rèn)識生命現(xiàn)象、探究疾病機(jī)制和提供了有力的技術(shù)支持。