把濾膜放在紙巾上于室溫晾干后,把濾膜(編號(hào)面朝上)放在一張保鮮膜上,并在保鮮膜上作幾個(gè)不對(duì)稱(chēng)的標(biāo)記,以使濾膜與性自顯影片位置對(duì)應(yīng)。
用第二張保鮮膜蓋住濾膜。加光片并加上增感屏于-70℃曝光12-16小時(shí)。
底片顯影后,在底片上貼一張透明硬紙片。在紙上標(biāo)記陽(yáng)性雜交信號(hào)的位置,同時(shí)在不對(duì)稱(chēng)分布點(diǎn)的位置上作出標(biāo)記。可從底片上取下透明紙,通過(guò)對(duì)比紙上的點(diǎn)與瓊脂上的點(diǎn)來(lái)鑒定陽(yáng)性菌落。
熒光原位雜交(FISH)技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過(guò)程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號(hào)的檢測(cè)比性信號(hào)的檢測(cè)更靈敏,可以檢測(cè)出低拷貝數(shù)的DNA序列,甚至可以檢測(cè)單個(gè)基因序列。
快速簡(jiǎn)便:FISH技術(shù)操作簡(jiǎn)便,雜交過(guò)程可以在數(shù)小時(shí)或數(shù)天內(nèi)完成,而且不需要過(guò)于復(fù)雜的設(shè)備,便于在實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展。