原位雜交雜交液
(一)雜交液內除含一定濃度的標記探針外,還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛白蛋白及載體DNA或RNA等。
(二)雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加,可以減低探針與組織標本之間的靜電結合。
(三)賈酰胺可使雜交溫度降低,所以雜交液中加入適量的甲酰胺,可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態結構的破壞以及標本的脫落。
(四)硫酸葡聚糖能與水結合,從而減少雜交液的有效容積,提高探針有效濃度,以達到提高雜交率的目的。
核酸原位雜交可根據其檢測物而分為細胞內原位雜交和組織切片內原位雜交;根據其所用探針及所要檢測核酸的不同又可分為DNA-DNA, RNA-DNA, RNA-RNA雜交。但不論哪種雜交都必須經過組織細胞的固定,預雜交,雜交,沖等一系列洗步驟及自顯影或酶法顯色以顯示雜交結果。
我們在這兒介紹的是整胚原位雜交,不同于一般的在載片上對細胞和組織切片進行探針雜交及檢測的原位雜交,
植物原位雜交除了在遺傳育種方面的應用,還在其他領域有著廣泛的應用,包括:
植物基因研究:植物基因是一種利用基因工程技術來人類遺傳疾病的方法。通過植物原位雜交技術,可以將人類基因導入到植物細胞中,并在植物細胞中表達出相應的蛋白質,為基因提供重要的物質基礎。
植物抗性研究:植物原位雜交技術可以用于研究植物對環境脅迫的抗性機制,例如抗旱、抗鹽、抗病等,有助于了解植物在環境脅迫下的生理和分子響應機制。
植物比較研究:通過植物原位雜交技術可以比較不同植物之間基因表達模式的差異,從而為植物分類和進化研究提供重要的參考依據。