同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?
一般情況下，如果操作沒有得到理想的結果，是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。
原位雜交實操中哪些因素比較重要?
重要的因素：溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率；光照影響著熒光染料的強度，所以探針要避光保存，其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存；各種試劑pH也要達到要求，這也直接關系到原位雜交的穩定性。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節以下的胚胎不處理，5體節到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
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