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植物啟動子篩選-武漢貝科新肽

武漢貝科新肽科技有限公司

主營產品：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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構建亞細胞定位載體時，GFP融合位置為什么有N端、C端之分？

若序列中存在信號肽，則構建載體時需避開這一端來融合熒光蛋白。需注意不同的融合方式可能會得到不同的定位結果，例如融合在熒光蛋白N端的目標蛋白一般無法得到過氧化物酶體的定位結果；融合在熒光蛋白C端的目標蛋白一般無法得到線粒體、質體的定位結果。

為什么不同的受體材料有時得到的定位結果不一樣？

不同物種的細胞在翻譯表達基因時，其表達模式和影響因子不同。受物種差異的影響，同一個載體在不同的受體材料中表達的位置可能不同，因此建議實驗時盡可能選用與目的基因來源相近的受體材料進行表達。

為什么不先對基因做預測，在預測的結果上直接做共定位？

不同的預測網站有不同的計算方法，同一個基因在不同的預測網站也可能得出不同的定位結果。另外所有的結果都應是基于實驗得到的，對于不清楚可能定位在哪里的基因，一般推薦先做普通定位，根據普通定位的結果再決定做哪種細胞器的共定位。

適用于什么實驗場景？

（1）基因功能研究，文章里總少不了這一項。

（2）研究蛋白相互作用，與酵母雙雜實驗結果相互驗證。

亞細胞定位的方法熒光技術熒光技術是一種常用的亞細胞定位方法，它利用標記目標蛋白質，然后使用熒光顯微鏡觀察其位置。這種方法具有高特異性、高靈敏度和高分辨率等優點，但也可能存在交叉反應等干擾因素。綠色熒光蛋白標記綠色熒光蛋白標記是一種非侵入性的亞細胞定位方法，它可以將目標蛋白質與綠色熒光蛋白融合，從而使其在熒光顯微鏡下可見。這種方法具有較好的特異性和靈敏度，但需要將目標蛋白質進行基因改造，可能影響其天然狀態。