&

GISH-貝科新肽(在線咨詢)

武漢貝科新肽科技有限公司

主營(yíng)產(chǎn)品：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動(dòng)子篩選
公司地址：湖北省武漢市洪山區(qū)關(guān)山大道289號(hào)紫菘逸景華庭二期109棟2層2002-3號(hào)

咨詢熱線： 15002786799

立即咨詢 QQ咨詢

信息詳情

原位雜交技術(shù)方法大致可分為：1.雜交前準(zhǔn)備，包括固定、取材、玻片和組織的處理，如何增強(qiáng)核酸探針的穿透性、減低背景染色等；2.雜交；3.雜交后處理；4.顯示（visualization）：包括性自顯影和非性標(biāo)記的顯色。固定原位雜交組織化學(xué)技術(shù)在固定劑的應(yīng)用和選擇上應(yīng)兼顧到三個(gè)方面：保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)，限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平；使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。DNA是比較穩(wěn)定的，mRNA是相對(duì)穩(wěn)定的但易為酶合成和降解。RNA卻絕然不同，非常容易被降解。因此，對(duì)于DNA的定位來(lái)說(shuō)，固定劑的種類和濃度并不十分重要。相反，在RNA的定位上，如果要使RNA的降解減少到低限度，那么，不僅固定劑的種類濃度和固定的時(shí)間十分重要，而且取材后應(yīng)盡快予以冷凍或固定。

原位雜交第二天

1）將探針回收，放于－20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。

2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。

3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。

4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復(fù)一次。

1）用MABT洗兩次，每次五分鐘，放在搖床輕輕搖動(dòng)。

2）室溫下加1ml 1：2：7溶液，時(shí)間為一小時(shí)。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶連，4C 冰箱過(guò)夜。

FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號(hào)檢測(cè)和圖像分析等。在探針制備過(guò)程中，使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來(lái)標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過(guò)程中，細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的，以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過(guò)程中，探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交，形成可檢測(cè)的熒光信號(hào)。在信號(hào)檢測(cè)和圖像分析過(guò)程中，使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測(cè)熒光信號(hào)并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。