同一樣本可以多次做原位雜交實驗嗎?
一般情況下,如果操作沒有得到理想的結果,是可以將探針洗滌然后進行再次的雜交的。如果使用的是直標型探針,還可以使用不同探針對同一樣本進行反復雜交。針對不同的樣本,處理方法略有不同。
原位雜交實操中哪些因素比較重要?
重要的因素:溫度、光照、濕度和試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標DNA的雜交效率;光照影響著熒光染料的強度,所以探針要避光保存,其已經雜交的片子可用防熒光淬火劑封片且避光保存;各種試劑pH也要達到要求,這也直接關系到原位雜交的穩定性。
原位雜交技術的定義和基本原理原位雜交技術是一種基于核酸分子雜交原理,將標記的核酸探針與生物組織或細胞中的DNA或RNA進行特異性結合,從而在細胞水平上檢測目標核酸序列分布的技術。原位雜交技術的基本原理是利用DNA或RNA的互補性,通過加熱或化學反應使探針與組織或細胞中的目標核酸序列形成雙鏈復合物,進而實現目標核酸序列的定位。
熒光原位雜交(FISH)技術具有以下優點:
高特異性:熒光探針的合成是定向的,保證了雜交過程的特異性,可以有效地降低非特異性雜交和背景干擾。
高靈敏度:熒光信號的檢測比性信號的檢測更靈敏,可以檢測出低拷貝數的DNA序列,甚至可以檢測單個基因序列。
快速簡便:FISH技術操作簡便,雜交過程可以在數小時或數天內完成,而且不需要過于復雜的設備,便于在實驗室開展。