原位雜交技術(in situhybridization)是以標記的核酸分子為探針,在組織細胞原位檢測特異核酸分子的技術。使含有特異序列、經過標記的核酸單鏈即探針,在適宜條件下與組織細胞中的互補核酸單鏈即靶核酸發生雜交,再以自顯影或細胞化學方法對標記探針進行探測,從而在細胞原位顯示特異的DNA或RNA分子。
可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標本,包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標本。也可以檢測組織芯片。
DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比,DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱,因此在雜交后的洗滌中不應使用甲醛。
探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列,則可據此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補,那么探針只能與靶序列發生輕度雜交。這意味著,探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去,可能無法正確檢測。
植物組織原位雜交是一種重要的分子生物學技術,它可以用來研究植物基因的表達和調控。該技術利用DNA探針與目標組織中的RNA或DNA結合,從而確定目標基因的表達模式和位置。本文將介紹植物組織原位雜交的原理、步驟和應用。
原理
植物組織原位雜交的原理是利用DNA探針與目標組織中的RNA或DNA結合,從而確定目標基因的表達模式和位置。DNA探針是一段已知序列的DNA分子,可以與目標RNA或DNA的互補序列結合。在組織原位雜交中,DNA探針通常標記有熒光染料或性同位素,以便于檢測。