原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。
3)置換2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘,重復(fù)一次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖床輕輕搖動(dòng)。
2)室溫下加1ml 1:2:7溶液,時(shí)間為一小時(shí)。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過(guò)夜。
原位雜交是一種生物學(xué)技術(shù),它可以在細(xì)胞或組織中特定部位檢測(cè)DNA或RNA的存在,而不需要將DNA或RNA分離出來(lái)。這項(xiàng)技術(shù)使用標(biāo)記的DNA或RNA探針,與細(xì)胞或組織中的相應(yīng)DNA或RNA進(jìn)行特異性結(jié)合,然后通過(guò)光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡觀察探針的位置和數(shù)量。
原位雜交的原理很簡(jiǎn)單。DNA或RNA分子具有互補(bǔ)的核苷酸序列,因此可以通過(guò)氫鍵相互結(jié)合。將標(biāo)記的DNA或RNA探針與細(xì)胞中的DNA或RNA進(jìn)行雜交,可以特異性地檢測(cè)這些探針的位置和數(shù)量。探針的數(shù)量和位置可以反映DNA或RNA在細(xì)胞中的水平和分布。
原位雜交的基本原理是利用標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的DNA或RNA進(jìn)行雜交,然后通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記來(lái)識(shí)別探針的位置。這使得研究人員能夠在細(xì)胞或組織中確定特定基因或基因組區(qū)域的位置和表達(dá)水平。
原位雜交可以用于多種類型的實(shí)驗(yàn)。例如,它可以用來(lái)檢測(cè)特定基因在發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)模式,或者確定特定基因變異在細(xì)胞中的分布。此外,原位雜交還可以用于診斷疾病,例如某些類型的,以及監(jiān)測(cè)效果。