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原位雜交-植物組織原位雜交-武漢貝科新肽科技公司

武漢貝科新肽科技有限公司

主營產品：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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以菌落原位雜交為例：對分散在若干個瓊脂平板上的少數菌落（100-200）進行篩選時，可采用該方法。將這些菌落歸并到一個瓊脂主平板以及已置于第二個瓊脂平板表面的一張纖維素濾膜上。經培養一段時間后，對菌落進行原位裂解。主平板應貯存于4℃直至得到篩選結果。

將少數菌落轉移到纖維素濾膜上

（1）在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2）用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上，再轉移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質粒的菌落。

（3）倒置平板，于37℃培養至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

（4）用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。

（5）用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應的結果。

（6）裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。

而是對完整的斑馬魚胚胎進行探針雜交及檢測，從整體上把握探針的結合部位，然后對胚胎進行切片，以確定探針結合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學研究中是一種非常重要的實驗方法，原位雜交的探針可以是同位素的探針，用自顯影來檢測；也可以是非同位素的探針，通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者，以標記探針，然后用酶聯的方法進行檢測。

原位雜交技術的實驗結果

原位雜交技術的實驗結果包括陽性信號和陰性信號的判斷標準。陽性信號是指探針與目標核酸序列特異性結合形成的雙鏈復合物，在顯色反應、熒光染色或性同位素標記下呈現出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標核酸序列結合，不呈現任何信號。實驗結果的分析需要結合探針的特異性和敏感性、組織或細胞的原始結構以及實驗條件等因素綜合進行。